摘要：黃霉素為磷酸化多糖類***，其**作用機理是通過干擾細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)物質(zhì)肽聚糖的生物合成從而抑制**的繁殖。黃霉素的促生長原理可能在于它能提高飼料中能量和蛋白質(zhì)的消化；能使腸壁變薄從而提高營養(yǎng)物質(zhì)的吸收；能有效地維持腸道菌群的平衡和瘤胃pH值的穩(wěn)定。
1簡介
飼料中黃霉素檢驗的高效液相色譜法測定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中黃霉素的測定，使用儀器501高效液相色譜儀。
2規(guī)范性引用文件
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GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
GB/T14699.1飼料采樣
3試樣制備
按GB/T14699.1抽取有代表性的飼料樣品，用四分法縮減取約200g，粉碎至過0.45mm孔徑
的分析篩，混勻，裝入磨口瓶中備用。
4原理
飼料中黃霉素經(jīng)50％的甲醇提取后，用pH6.0磷酸鹽緩沖液稀釋至所需濃度，反相色譜柱進(jìn)行分離，UV501紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量。
5試劑和溶液
5.1除非另有說明，本法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682二級水的規(guī)定。
5.2黃霉素對照品：純度100％。
5.3黃霉素儲備液：精密稱取黃霉素對照品適量，用甲醇配制成1mg/mL，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備溶（貯存4℃冰箱保存10天）。
5.4黃霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液：量取適量黃霉素儲備液，用pH6.0磷酸鹽緩沖液稀釋成濃度為0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.50μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液（4℃保存7天）。
5.5甲醇：色譜純。
5.6乙腈：色譜純。
5.7甲酸銨。
5.8磷酸。
5.9pH6.0磷酸鹽緩沖液：稱取磷酸氫二鉀2g與磷酸二氫鉀8g，加水使溶解成1000mL，即得。
6儀器設(shè)備
6.1501高效液相色譜儀（配UV501紫外檢測器）。
6.2飼料粉碎機。
6.3分析天平，感量0.0001g，0.001g。
7測定步驟
7.1試樣提取
稱取粉碎后的飼料樣品5g（**至0.001g），加入50.0mL50％甲醇溶液提取后，過濾，濾
液用磷酸鹽緩沖液pH6.0稀釋至所需的適當(dāng)濃度，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后供高效液相色譜儀分析。
7.2色譜條件
色譜柱：VertceC18柱（4.6×150mm，5μm）或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。
流速：0.7mL/min。
檢測波長：258nm。
進(jìn)樣量：20μL。
流動相：乙腈:0.2％甲酸銨水溶液=45:55（用10％磷酸調(diào)節(jié)至pH4.9）
7.3上機測定
取標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品試液分別注入液相色譜儀，記錄譜圖，按外標(biāo)法以峰面積進(jìn)行計算。
8結(jié)果計算
按照下式計算試樣中**的含量：
X=A×Cs×V×1000/As×m×1000×n
式中：
X——試樣中**的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
A——應(yīng)的色譜峰面積響應(yīng)值；
As——標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的色譜峰面積響應(yīng)值；
V——定容體積，單位為毫升（mL）；
Cs——標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）；
n——稀釋倍數(shù)。
平行測定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。
9檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
9.1靈敏度
本方法的檢測限為0.5mg/kg。
9.2準(zhǔn)確度
本方法添加濃度1.0mg/kg，回收率為80％～120％。9.3
精密度
本方法的批內(nèi)變異系數(shù)CV≤10％，批間變異系數(shù)CV≤15％。
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